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IHC實驗步驟繁瑣，包括切片制作（固定，脫水，透明，包埋，切片，貼片，烤片），脫蠟，水化，阻斷，抗原修復，封閉，一抗孵育，二抗孵育，顯色，復染，封片和分析等，在上次的推文中向您介紹了切片制作和抗原修復兩個步驟中的常見問題及解析，本次為您帶來的是封閉和一抗孵育中的注意事項。文末還附有IHC通關秘籍——Bioss全新上市的IHC即用型試劑盒，助您一次獲得文獻級的圖像結果。
封閉
1.圖片背景值過高。
解決方法：①在使用抗體前采用溶于甲醇或水的3% H2O2或使用專門的試劑盒進行淬滅，并使用堿性磷酸酶抑制劑，以減少內源性過氧化物酶或磷酸酶的干擾；
②使用生物素類的二抗系統(tǒng)來檢測如腎臟和肝臟等富含生物素的組織樣本時，可以在一抗孵育前用親和素/生物素封閉試劑進行封閉，以減少內源性生物素活性的干擾；
③在加入抗體前把多余的緩沖液吸干，而非對組織樣品進行洗滌，以減少來自內源性酶的干擾；
④蛋白封閉時間不足導致背景增強甚至出現假陽性，應選擇合適的封閉液，適當延長封閉時間；
一抗孵育
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受篇幅限制，本次IHC實驗過程中的常見問題解析就先分享到這里。如果您還想更深入的學習IHC相關問題，可以繼續(xù)關注本系列后續(xù)文章。如果您在使用我們的產品時出現任何問題，請隨時聯(lián)系我們，Bioss資深IHC實驗專家將為您全面講解，深度分析，幫助您輕松解決IHC的“疑難雜癥"！
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