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清楚這些內容,使用cck8檢測試劑盒不再是難題!

更新時間:2023-06-09  |  點擊率:1245
  cck8檢測試劑盒為MTT 法的替代方法,是一種基于WST(水溶性四唑鹽,化學名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。可用于藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏等試驗。
  使用說明:
  一、制作標準曲線(測定細胞具體數量時 (測定細胞具體數量時)
  1、先用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量,然后接種細胞。
  2、按比例依次用培養基等比稀釋成一個細胞濃度梯度,一般要做 3-5 個細胞濃度梯度,每組 3-6 個復孔。
  3、接種后培養至細胞貼壁,然后加 CCK-8 試劑培養一定時間后測定 OD 值,制作出一條以細胞數量為橫坐標(X 軸),OD 值為縱坐標(Y 軸)的標準曲線。根據此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數量(試用此標準曲線的前提是實驗的條件要一致,便于確定細胞的接種數量以及加入 CCK-8 后的培養時間。)
  二、細胞活性檢測
  1、在 96 孔板中接種細胞懸液(100?L/孔)。將培養板放在培養箱中預培養(在 37℃,5% CO2 的條件下)。
  2、向每孔加入 10?L CCK-8 溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響 OD 值的讀數)。
  3、將培養板在培養箱內孵育 1-4 小時。
  4、用酶標儀測定在 450nm 處的吸光度。
  5、cck8檢測試劑盒如果暫時不測定 OD 值,打算以后測定的話,可以向每孔中加入 10?L 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)溶液,并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在 24 小時內吸光度不會發生變化。
  三、細胞增值-毒性檢測
  1、在 96 孔板中配置 100  µL的細胞懸液。將培養板在培養箱預培養 24 小時(在 37 ℃,5% CO2 的條件下)。
  2、向培養板加入 10 µL不同濃度的待測物質。在培養箱孵育一段適當的時間(例如:6、12、24 或 48 小時)。
  3、向每孔加入 10  µLCCK-8 溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響 OD 值的讀數)。如果待測物質有氧化性或還原性的話,可在加 CCK-8 之前更換新鮮培養基(除去培養基,并用培養基洗滌細胞兩次,然后加入新的培養基),去掉藥物影響。
  4、將培養板在培養箱內孵育 1-4 小時。
  5、用酶標儀測定在 450 nm 處的吸光度。
  6、cck8檢測試劑盒如果暫時不測定 OD 值,打算以后測定的話,可以向每孔中加入 10?L 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)溶液,并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在 24 小時內吸光度不會發生變化。
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